Проявление и устранение эффекта “упаковки” в средах с непроникающими и проникающими криопротекторами

Анотація

ДоÑліджували ÑƒÑˆÐºÐ¾Ð´Ð¶ÐµÐ½Ð½Ñ ÐµÑ€Ð¸Ñ‚Ñ€Ð¾Ñ†Ð¸Ñ‚Ñ–Ð² при заморожуванні з низьким (0,8%) Ñ– виÑоким (40%) гематокритом у Ñередовищах, Ñкі міÑÑ‚ÑÑ‚ÑŒ непроникаючі полімерні кріопротектори (поліетиленгліколь з м. м. 1500 (ПЕГ-1500), декÑтран) та проникаючий кріопротектор диметілÑульфокÑид (ДМСО). УÑтановлено, що проÑв Ñ– уÑÑƒÐ½ÐµÐ½Ð½Ñ ÐµÑ„ÐµÐºÑ‚Ñƒ “упакуваннціÑтотно залежать від іонної Ñили кріоконÑерванта. При фізіологічній іонній Ñилі (0,15 моль/л NaCl) Ð´Ð»Ñ Ð¿Ñ€Ð¾Ñву даного ефекту необхідно ÐºÐ¾Ð¼Ð±Ñ–Ð½ÑƒÐ²Ð°Ð½Ð½Ñ ÐŸÐ•Ð“-1500 або декÑтрану в концентраціÑÑ… 5 та 10% відповідно з кріопротектором ДМСО в концентрації 5% або Ð·Ð±Ñ–Ð»ÑŒÑˆÐµÐ½Ð½Ñ ÐºÑ–Ð»ÑŒÐºÐ¾ÑÑ‚Ñ– ПЕГ-1500 та декÑтрану до 10 Ñ– 15% відповідно. Якщо іонна Ñила нижче фізіологічної (0,05 моль/л NaCl), то зазначеного ÐºÐ¾Ð¼Ð±Ñ–Ð½ÑƒÐ²Ð°Ð½Ð½Ñ Ð¿Ð¾Ð»Ñ–Ð¼ÐµÑ€Ð½Ð¸Ñ… кріопротекторів Ñ– ДМСО доÑтатньо Ð´Ð»Ñ ÑƒÑÑƒÐ½ÐµÐ½Ð½Ñ ÐµÑ„ÐµÐºÑ‚Ñƒ “упакуваннÑâ€. Однак при фізіологічній іонній Ñилі Ð´Ð»Ñ ÑƒÑÑƒÐ½ÐµÐ½Ð½Ñ Ð´Ð°Ð½Ð¾Ð³Ð¾ ефекту необхідна кількіÑÑ‚ÑŒ ДМСО в концентрації 15%. Ðналіз отриманих результатів Ñ– даних літератури дозволÑÑ” припуÑтити, що в умовах швидкого заморожуваннÑ-відігріву проÑв ефекту “упакуваннцвизначаєтьÑÑ Ñтадією швидкого відігріву, коли відбуваєтьÑÑ Ð¿Ñ€Ð¸Ñ€Ñ–ÑÑ‚ оÑмотичного впливу за рахунок Ñ€Ð¾Ð·Ð²ÐµÐ´ÐµÐ½Ð½Ñ Ð·Ð¾Ð²Ð½Ñ–ÑˆÐ½ÑŒÐ¾Ð³Ð¾ Ñередовища водою, що Ñпоконвічно була внутрішньо-клітинною. Ð—Ð²ÑƒÐ¶ÐµÐ½Ð½Ñ Ð³Ñ€Ð°Ð½Ð¸Ñ†ÑŒ зміни обÑÑгу клітин у циклі заморожуваннÑ-відігріву у Ñередовищі, Ñке міÑтить проникаючі й непроникаючі кріопротектори, призводить до Ð²Ð¸Ð½Ð¸ÐºÐ½ÐµÐ½Ð½Ñ ÑтійкоÑÑ‚Ñ– до зазначеного оÑмотичного впливу та уÑÑƒÐ½ÐµÐ½Ð½Ñ ÐµÑ„ÐµÐºÑ‚Ñƒ “упакуваннÑâ€.