ВлиÑние криоконÑÐµÑ€Ð²Ð¸Ñ€Ð¾Ð²Ð°Ð½Ð¸Ñ Ð½Ð° ÑкÑпреÑÑию хромогранина Рв культуре клеток надпочечников неонатальных Ñвиней
DOI:
https://doi.org/10.15407/cryo29.04.344Ключевые слова:
культура клеток надпочечников, мультиклеточные Ñфероиды, хромогранин Ð, криоконÑервирование, хромаффинные клеткиАннотация
ИÑÑледована ÑкÑпреÑÑÐ¸Ñ Ñ…Ñ€Ð¾Ð¼Ð¾Ð³Ñ€Ð°Ð½Ð¸Ð½Ð° Ð (ХрÐ) в хромаффинных клетках надпочечников новорожденных пороÑÑÑ‚ поÑле криоконÑервированиÑ. Фрагменты ткани надпочечников криоконÑервировали Ñ Ð¸Ñпользованием 10% диметилÑульфокÑида и контролированной ÑкороÑти Ð¾Ñ…Ð»Ð°Ð¶Ð´ÐµÐ½Ð¸Ñ 1 град /мин до –80град Ñ Ð´Ð°Ð»ÑŒÐ½ÐµÐ¹ÑˆÐ¸Ð¼ погружением в жидкий азот. Ð’ качеÑтве интактного ÐºÐ¾Ð½Ñ‚Ñ€Ð¾Ð»Ñ Ð¸Ñпользовали незамороженные фрагменты. Ферментативным методом из фрагментов получали ÑуÑпензию клеток, которую помещали в уÑÐ»Ð¾Ð²Ð¸Ñ ÐºÑƒÐ»ÑŒÑ‚Ð¸Ð²Ð¸Ñ€Ð¾Ð²Ð°Ð½Ð¸Ñ. Культуры клеток из интактных и криоконÑервированных фрагментов предÑтавлÑли Ñобой моноÑлой Ñ Ð¿Ñ€Ð¸ÐºÑ€ÐµÐ¿Ð»ÐµÐ½Ð½Ñ‹Ð¼Ð¸ на нем мультиклеточными Ñфероидами (МС). Методом цитофлуориметрии Ñ Ð¸Ñпользованием антител к ХрРуÑтановлено, что количеÑтво ХрÐ-позитивных клеток в криоконÑервированных образцах значимо не отличаетÑÑ Ð¾Ñ‚ ÐºÐ¾Ð½Ñ‚Ñ€Ð¾Ð»Ñ ((31,1 ± 2,7) и (32,9 ± 3,6)%, ÑоответÑтвенно). ИммуноцитохимичеÑким методом в обеих культурах на начальные Ñутки ÐºÑƒÐ»ÑŒÑ‚Ð¸Ð²Ð¸Ñ€Ð¾Ð²Ð°Ð½Ð¸Ñ Ð²Ñ‹Ñвлены ХрÐ-позитивные клетки как в ÑоÑтаве моноÑлоÑ, так и в МС. Ð’ течение ÐºÑƒÐ»ÑŒÑ‚Ð¸Ð²Ð¸Ñ€Ð¾Ð²Ð°Ð½Ð¸Ñ ÐºÐ¾Ð»Ð¸Ñ‡ÐµÑтво Ñтих клеток значимо не отличалоÑÑŒ, однако они перераÑпределÑлиÑÑŒ: уменьшалоÑÑŒ их Ñодержание в моноÑлое и увеличивалоÑÑŒ в МС. Сходные отноÑительное количеÑтво клеток Ñ ÑкÑпреÑÑией ХрРи характер их раÑÐ¿Ñ€ÐµÐ´ÐµÐ»ÐµÐ½Ð¸Ñ Ð² обеих культурах ÑвидетельÑтвуют о том, что криоконÑервирование фрагментов надпочечников в иÑпользованном режиме ÑохранÑет оÑновные Ñтруктурно-функциональные ÑвойÑтва хромаффинных клеток.
Â
Probl Cryobiol Cryomed 2019; 29(4): XXX–XXX
Библиографические ссылки
Bondarenko TP, Legach EI, Kiroshka VV, et al. [Cultivation, cryopreservation and tissue transplantation of endocrine glands]. In: Goltsev AN, editor. [Actual problems of cryobiology and cryomedicine]. Kharkiv: IPCC; 2012. p. 361-401. Russian.
Bozhok GA, Sidorenko OS, Plaksina EM, et al. Neural differentiation potential of sympathoadrenal progenitors derived from fresh and cryopreserved neonatal porcine adrenal glands. Cryobiology. 2016; 73(2): 152-61. CrossRef
Chung KF, Sicard F, Vukicevic V, et al. Isolation of neural crest derived chromaffin progenitors from adult adrenal medulla. Stem Cells. 2009; 27(10): 2602-13. CrossRef
Elias S, Delestre C, Ory S, et al. Chromogranin A induces the biogenesis of granules with calcium- and actin-dependent dynamics and exocytosis in constitutively secreting cells. Endocrinology. 2012; 153(9): 4444-56. CrossRef
Fuller B, Lane N, Benson E, editors. Life in the frozen state. New York: CRC Press; 2004. 663 p. CrossRef
Gkolfinopoulos S, Tsapakidis K, Papadimitriou K, et al. Chromogranin A as a valid marker in oncology: clinical application or false hopes. World J Methodol. 2017; 7(1):9-15. CrossRef
Huber K. The sympathoadrenal cell lineage: specification, diversification, and new perspectives. Dev Biol. 2006; 298(2): 335-43. CrossRef
Kent C, Coupland RE. Localisation of chromogranin A and B, met-enkephalin-arg6-gly7-leu8 and PGP9.5-like immunoreactivity in the developing and adult rat adrenal medulla and extra-adrenal chromaffin tissue. J Anat. 1989;16(6): 213-25. PubMed
Livett BG, Borges R. Advances in cell culture for chromaffin cells and related cell types. In: Borges R, Gandia L, editors. Cell biology of the chromaffin cell. La Laguna, Madrid: Instituto Teófilo Hernando; 2004. p. 261-7.
Marotta V, Zatelli MC, Sciammarella C, et al. Chromogranin A as circulating marker for diagnosis and management of neuroendocrine neoplasms: more flaws than fame. Endocr Relat Cancer. 2018; 25(1): R11-R29. CrossRef
Plaksina EM, Sidorenko OS, Bozhok GA. Cryopreservation of multicellular spheroids derived from newborn piglet adrenal glands. Probl Cryobiol Cryomed. 2017; 27: 322-33. CrossRef
Plaksina EM, Sidorenko OS, Legach YeI, et al. [Expression of β-III-tubulin in neonatal adrenal cell culture: comparison of monolayer and 3D cultivation]. The Journal of V.N. Karazin Kharkiv National University. Series "Biology". 2017; 28: 76-86. Russian. CrossRef
Santana MM, Chung KF, Vukicevic V, et al. Isolation, characterization and differentiation of progenitor cells from human adult adrenal medulla. Stem Cells Transl. Med. 2012; 1(11): 783-91. CrossRef
Saxena S, Wahl J, Huber-Lang MS, et al. Generation of murine sympathoadrenergic progenitor-like cells from embryonic stem cells and postnatal adrenal glands. PLoS ONE [Internet]. 2013 May [cited10.10.2019]; 8(5): e64454. Available from: https://journals.plos.org/plosone/article?id=10.1371/journal.pone.0064454 CrossRef
Sidorenko OS, Bozhok GA, Bilavskaya SB, et al. [Morphological and functional characteristics of the culture of adrenal gland cells of newborn piglets.] Biotechnology 2012; 5 (5): 72-81. Russian.
Sidorenko OS, Bozhok GA, Legach EI, et al. [Obtaining primary culture of adrenal cells of newborn piglets]. Medytsyna Sogodni i Zavtra. 2011; 1(2): 248-52. Russian.
Sidorenko OS, Bozhok GA, Legach EI, et al. The study of the possibility of obtaining and cryopreservation of the primary culture of adrenal cells of newborn piglets. Problems of Cryobiology. 2011; 21(1): 58- 67.
Unsicker K, Müller TH. Purification of bovine adrenal chromaffin cells by differential plating. J Neurosci Methods. 1981; 4(3): 227-41. CrossRef
Xu ZQ, Lew JY, Harada K, et al. Immunohistochemical studies on phosphorylation of tyrosine hydroxylase in central catecholamine neurons using site-and phosphorylation state-specific antibodies. Neuroscience. 1998; 82(3): 72-38. CrossRef
Yoo SH, Huh YH, Hur YS. Inositol 1,4,5-trisphosphate receptor in chromaffin secretory granules and its relation to chromogranins. Cell Mol Neurobiol. 2010; 30:115-61. CrossRef
Загрузки
Опубликован
Как цитировать
Выпуск
Раздел
Лицензия
Авторы, публикующие в данном журнале, соглашаются со следующим:
- Авторы сохраняют за собой авторские права на работу и предоставляют журналу право первой публикации работы на условиях лицензии Creative Commons Attribution License, которая позволяет другим распространять данную работу с обязательным сохранением ссылок на авторов оригинальной работы и оригинальную публикацию в этом журнале.
- Авторы сохраняют право заключать отдельные контрактные договоренности, касающиеся не-эксклюзивного распространения версии работы в опубликованном здесь виде (например, размещение ее в институтском хранилище, публикацию в книге), со ссылкой на ее оригинальную публикацию в этом журнале.
- Авторы имеют право размещать их работу в сети Интернет (например в институтском хранилище или персональном сайте) до и во время процесса рассмотрения ее данным журналом, так как это может привести к продуктивному обсуждению и большему количеству ссылок на данную работу (См. The Effect of Open Access).
